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應(yīng)如何正確使用液相色譜柱

更新時間:2024-10-18

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液相色譜柱作為液相色譜分析不可少的分析助手,如何正確操作使用色譜柱,避免柱效降低。
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動

溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,因此,在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。

逐漸改變?nèi)軇┑慕M成

特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳弧?/span>

色譜柱一般不能反沖

一般來說色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。

使用適宜的流動相

選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。有時可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時,預(yù)柱為硅膠,可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠飽和",避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

用強溶劑沖洗色譜柱

經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時,對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右。

禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜

保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。

色譜柱損壞及時處理

色譜柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi),使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大。在后兩種情況發(fā)生時,小心擰開柱接頭,用潔凈小鋼將柱頭填料取出12mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當(dāng)溶劑濕潤的固定相(與柱內(nèi)相同)填滿色譜柱,壓平,再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善,但是很難恢復(fù)到新柱的水平。

柱子失效通常是柱端部分,在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(530mm),可以起到保護(hù)、延長柱壽命的作用。采用保護(hù)柱會損失一定的柱效,這是值得的。通常色譜柱壽命在正確使用時可達(dá)2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料,只能在pH=29范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時間后,可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂,特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀?/span>

注意維護(hù)新液相色譜柱

新的液相色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷,使柱效下降,這時也可補加填料使柱效恢復(fù)。每次工作完后,最好用洗脫能力強的洗脫液沖洗,例如,ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動相時,使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道,不宜長期與之接觸。裝在HPLC液相色譜儀上柱子如不經(jīng)常使用,應(yīng)每隔45天開機沖洗15分鐘。

 

 


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